PENGUKURAN KADAR MDA DALAM PLASMA TIKUS

PENGUKURAN KADAR MDA DALAM PLASMA TIKUS

      Bahan :

1.      Plasma :diambil dari pembuluh dekat mata dengan penambahan anti         koagulan EDTA ataupun heparin.

2.      MDA dari merck 820756.

3.      TBA dari Sigma-aldrich T5500

4.      TCA dari merck 100807

5.      EDTA

6.      Heparin

7.      Ethanol merck 100983

      Alat :

1.                  Spektrofotometer Shimadzu UV-1800

2.                  Mikropipet 5-50µL

3.                  Mikropipet 100-1000µL

4.                  Tabung reaksi 100 pcs

5.                  Sentrifuse

6.                  Waterbath

7.                  Rak tabung reaksi 2 pcs

8.                  Kuvet kwarsa 2 pcs

9.                  Labu takar 100 ml 1 pcs

10.              Labu takar 5 ml 14 pcs

      PREPARASI BAHAN

1.      TCA 10 % b/v : 10 gr TCA merck 100807 diaddkan 100 ml dengan Aquades saring.

2.      TBA 0,67 % b/v : 0,67 gr TBA Sigma-aldrich T5500-25G +10 ml DMSO merck 802912 diaddkan 100 ml dengan aquades saring.

      PREPARASI SAMPEL

1.      1 ml darah tikus diambil dengan pipa kapiler melalui pembuluh intravena pada samping mata tikus, darah dialirkan ke ependorf yang telah diberi anti koagulan EDTA/Heparin.

2.      Sentrifuse darah-EDTA, pisahkan plasmanya dengan pipet.

      PREPARASI STANDAR MDA

1.      5 µL MDA dilarutkan dengan 1ml Ethanol kemudian dilarutkan dengan aquades hingga volume 100 ml.(Stok Larutan

2.      Encerkan Larutan Stok hasil no 1

PREPARASI STANDAR MDA DARI BAHN MERCK NO.CATALOG 820756
5 µL mda Masa jenis 0,990 gr/cm3 97% GC area dilarutkan 2 ml Ethanol pa diaddkan 100 ml
NO	Konsentrasi MDA µM	Stok 584,8355 µM (µL)	Aquadest (µL)	Total Volume (µL)
1	0,2924	5,0	4995,0	5000
2	0,5848	10,0	4990,0	5000
3	0,8773	15,0	4985,0	5000
4	1,1697	20,0	4980,0	5000
5	1,4621	25,0	4975,0	5000
6	5,8484	100,0	4900,0	5000
7	11,6967	200,0	4800,0	5000
8	17,5451	300,0	4700,0	5000
9	23,3934	400,0	4600,0	5000
10	29,2418	500,0	4500,0	5000
11	35,0901	600,0	4400,0	5000
12	40,9385	700,0	4300,0	5000
13	46,7868	800,0	4200,0	5000
14	58,4836	1000,0	4000,0	5000

      PENGUJIAN

 

BAGAN SPEKTROFOTOMETRI ANALISIS MDA DALAM PLASMA DARAH
Pereaksi/Bahan	Sampel	Standar MDA no 1-14	Blanko
Aquades(ml)	0	0	0,5
Std MDA (ml)	0	0,5	0
Plasma (ml)	0,5	0	0
TCA 10 %b/v (ml) dingin	1	1	1
Vortex 10 s	√	√	√
Sentrifuse 20 menit	√	√	√
Pisahkan supernatan	√	√	√
TBA 0,37 %b/v (ml)	1,5	1,5	1,5
Ukur serapan pd 532 nm	√	√	√